一種篩選高表達(dá)FAD-GDH重組畢赤酵母菌株的方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN202111133183.0 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN113717872A 公開（公告）日 2021-11-30
申請(qǐng)公布號(hào) CN113717872A 申請(qǐng)公布日 2021-11-30
分類號(hào) C12N1/19;C12N15/53;C12N15/81;C12N15/66;C12Q1/32;C12Q1/04;G01N21/31;C12R1/84 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 董聰;王玥;高慶華;羅同陽(yáng);王慶慶;劉攀 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 河北省微生物研究所有限公司
代理機(jī)構(gòu) 北京貴都專利代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 李新鋒
地址 071000 河北省保定市競(jìng)秀區(qū)五四中路2089號(hào)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提供了一種篩選高表達(dá)FAD?GDH的重組畢赤酵母菌株的方法。包括如下步驟：通過(guò)依次使用Zeocin、G418及G418濃度梯度篩選，以增加重組菌中FAD?GDH基因拷貝數(shù)。首先，利用前期獲得的密碼子偏好性優(yōu)化的FAD?GDH基因片段分別與表達(dá)載體pPICZαA、pMD連接，構(gòu)建重組表達(dá)載體pPICZαA?GDH和pMD?GDH；然后，將pPICZαA?GDH電轉(zhuǎn)入畢赤酵母X33構(gòu)建重組子，使用Zeocin及試管發(fā)酵篩選獲得畢赤酵母重組菌株X33?GDH?2，將其制成感受態(tài)；最后將pMD?GDH電轉(zhuǎn)入X33?GDH?2感受態(tài)細(xì)胞，利用G418濃度梯度平板和試管發(fā)酵進(jìn)行篩選。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)入pMD?GDH后100μg/mlG418平板上的轉(zhuǎn)化子X33?GDH?2?1酶活比X33?GDH?2提高94％；2000μg/mlG418梯度平板上菌株X33?GDH?2?17酶活最高，比X33?GDH?2?1提高97％。結(jié)果表明了依次使用不同篩選標(biāo)記及濃度梯度策略有助于提高FAD?GDH的表達(dá)量。