一種全長(zhǎng)cDNA合成方法及其測(cè)序文庫(kù)的構(gòu)建

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201810269723.X 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN108410856A 公開(kāi)（公告）日 2018-08-17
申請(qǐng)公布號(hào) CN108410856A 申請(qǐng)公布日 2018-08-17
分類號(hào) C12N15/10;C40B50/06 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 王鄒;章高迪;楊帆;丁瓊;郝升;丁悅;郭靜 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 武漢光谷創(chuàng)贏醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司
代理機(jī)構(gòu) 杭州千克知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 裴金華
地址 430000 湖北省武漢市東湖新技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)高新大道666號(hào)生物創(chuàng)新園B5棟1-3層
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開(kāi)了一種全長(zhǎng)cDNA合成方法及其測(cè)序文庫(kù)的構(gòu)建。該方法包括以下步驟：（1）Total RNA的提?。唬?）將步驟（1）中提取的Total RNA通過(guò)Oligo dT引物和長(zhǎng)鏈逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成第一鏈cDNA；（3）將步驟（2）中第一鏈cDNA作為模板，通過(guò)連接酶進(jìn)行雙鏈接頭的連接；（4）將步驟（3）中的連接有雙鏈接頭的第一鏈cDNA在聚合酶的作用下進(jìn)行雙鏈富集，得到一種全長(zhǎng)雙鏈cDNA。通過(guò)該種全長(zhǎng)cDNA合成方法得到一種無(wú)需進(jìn)行片段化處理的全長(zhǎng)cDNA，構(gòu)建其測(cè)序文庫(kù)，同時(shí)RNA 5’端不完整或者已降解的序列則不會(huì)發(fā)生此反應(yīng)，避免了影響后續(xù)分析。