人原代肝細(xì)胞與肝非實質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201310282851.5 申請日 -
公開（公告）號 CN103509751B 公開（公告）日 2015-02-18
申請公布號 CN103509751B 申請公布日 2015-02-18
分類號 C12N5/071(2010.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 胡康洪;周明;曹曉蓓 申請（專利權(quán)）人 康珞生物科技（常州）有限公司
代理機(jī)構(gòu) 武漢開元知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 陳家安
地址 430071 湖北省武漢市高新大道666號光谷生物城B1棟411
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種人原代肝細(xì)胞與肝非實質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)方法，該方法是將新鮮的肝組織經(jīng)暴露的血管用灌注溶液I和灌注溶液II沖洗干凈；直至肝組織失去彈性消化完全；然后置于含有細(xì)胞洗液的培養(yǎng)皿中，篩選得到單細(xì)胞懸液；低密度接種到膠原包被的培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，首先在生長因子的作用下形成100%融合度的單層共培養(yǎng)；最后置于加入含有2%DMSO的維持培養(yǎng)液培養(yǎng)；肝細(xì)胞堆積形成肝非實質(zhì)細(xì)胞環(huán)繞、入侵生長的肝島狀結(jié)構(gòu)。本發(fā)明利用常規(guī)的肝細(xì)胞分離技術(shù)，實現(xiàn)了長達(dá)120天的肝細(xì)胞體外長期培養(yǎng)與長達(dá)72天保持HBV易感性。并且該系統(tǒng)可發(fā)展為新的抗HBV藥物篩選與評價平臺，對抗病毒藥物研究具有重要價值。