一種快速篩選sgRNA的基因敲除試劑盒及方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201710019880.0 申請日 -
公開（公告）號 CN106591366A 公開（公告）日 2017-04-26
申請公布號 CN106591366A 申請公布日 2017-04-26
分類號 C12N15/85(2006.01)I;C12N15/867(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 卿志榮;鄭幫;郭帥;修朝陽 申請（專利權(quán)）人 上海睿玻生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) - 代理人 -
地址 200233 上海市徐匯區(qū)桂平路333號4號樓408室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種快速篩選sgRNA的基因敲除試劑盒及方法。其中試劑盒包括：盒體、試劑A、試劑B。該試劑盒利用含有螢火蟲螢光素酶全長編碼序列與綠色熒光蛋白C端融合獲得的pCAG?mCherry?Luc質(zhì)粒，并將靶向基因組序列插入綠色熒光蛋白起始密碼子前，最終將該質(zhì)粒與sgRNA以及CRISPR?Cas9的表達(dá)質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染HEK293FT細(xì)胞，通過觀察紅色熒光蛋白亮度和熒光素酶活力檢測從而快速的定性或定量測定sgRNA介導(dǎo)基因組修飾活性，并采用該領(lǐng)域常規(guī)方法驗(yàn)證sgRNA篩選系統(tǒng)在慢病毒系統(tǒng)中的有效性。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于可以簡單、快速構(gòu)建任何靶基因的模擬基因組，并且更快速、簡便評價(jià)sgRNA活性且精確定量其sgRNA活性。