一種高通量篩選核酸酶的方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202111180434.0 申請日 -
公開（公告）號 CN114134130A 公開（公告）日 2022-03-04
申請公布號 CN114134130A 申請公布日 2022-03-04
分類號 C12N9/22（2006.01）I;C12N15/55（2006.01）I;C12N15/81（2006.01）I;C12N1/19（2006.01）I;G01N21/64（2006.01）I;C12Q1/34（2006.01）I;C12R1/865（2006.01）N 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 魏煒;雋葉雯;李季;趙勁 申請（專利權(quán)）人 江蘇南創(chuàng)化學(xué)與生命健康研究院有限公司
代理機(jī)構(gòu) 南京常青藤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 金迪
地址 210036江蘇省南京市棲霞區(qū)仙林大道163號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種高通量篩選核酸酶的方法，包括如下步驟：隨機(jī)突變核酸酶基因，并構(gòu)建線性核酸酶突變文庫；制成核酸酶文庫突變酵母細(xì)胞；將Azide?NHS標(biāo)記到突變酵母細(xì)胞表面后與DBCO?引物共孵育；帶有引物的突變酵母細(xì)胞于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，再與底物共孵育；將洗滌后的酵母細(xì)胞與探針共孵育，反應(yīng)后檢測所得酵母細(xì)胞的熒光強度，篩選出目標(biāo)核酸酶。本發(fā)明基于核酸酶突變體文庫中的釀酒酵母細(xì)胞來篩選高活性核酸酶，篩選步驟簡單，偶聯(lián)了DNA產(chǎn)物的長度與酵母表面核酸酶的酶活，在反應(yīng)原位檢測熒光強度，更加快速且高效，實現(xiàn)利用FACS的酶活高通量篩選，對核酸酶的定向進(jìn)化具有深遠(yuǎn)意義。