一種分離型內(nèi)含肽作為連接手段進行胞內(nèi)合成BLA無痕索烴及其制備方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202011618569.6 申請日 -
公開（公告）號 CN114685678A 公開（公告）日 2022-07-01
申請公布號 CN114685678A 申請公布日 2022-07-01
分類號 C07K19/00（2006.01）I;C12N15/62（2006.01）I;C12N15/70（2006.01）I 分類 有機化學(xué)〔2〕;
發(fā)明人 張文彬;王智輝 申請（專利權(quán)）人 北京大學(xué)
代理機構(gòu) 無錫華源專利商標(biāo)事務(wù)所（普通合伙） 代理人 -
地址 214000江蘇省無錫市錫山經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)芙蓉中三路99號瑞云5座507室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 一種分離型內(nèi)含肽作為連接手段進行胞內(nèi)合成BLA無痕索烴及其制備方法，屬于蛋白質(zhì)偶聯(lián)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的制備方法為：（1）基因質(zhì)粒構(gòu)建：將目標(biāo)蛋白的N端和C端分別融合分離型內(nèi)含肽的兩部分IC與IN；經(jīng)過反式剪切，IC與IN脫除實現(xiàn)目標(biāo)蛋白質(zhì)的首尾相連，唯一保留部分為實現(xiàn)反式剪切必需的氨基酸殘基，得到內(nèi)含肽基因卡帶；（2）將步驟（1）中構(gòu)建得叨叨額內(nèi)含肽基因卡帶引入載體質(zhì)粒中；（3）在細(xì)胞中表達上述所述載體質(zhì)粒；（4）對上述載體質(zhì)粒進行蛋白表達與純化，最終得到BLA無痕索烴。本發(fā)明無痕BLA索烴intX?FL的催化速率以及催化能力都較好，最大程度減少融合成分、實現(xiàn)嚴(yán)格意義的主鏈環(huán)化提供極好的平臺。