一種L 天冬氨酸氧化酶包涵體純化復(fù)性方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201610864870.2 申請日 -
公開（公告）號 CN106636024A 公開（公告）日 2017-05-10
申請公布號 CN106636024A 申請公布日 2017-05-10
分類號 C12N9/06;C12N15/70 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 鄒培建;王鵬舉;張文宇;蔣溱;楊錦勛 申請（專利權(quán)）人 蘇州埃德蒙生物技術(shù)有限公司
代理機(jī)構(gòu) 南京蘇科專利代理有限責(zé)任公司 代理人 姚姣陽
地址 215000 江蘇省蘇州市蘇州太倉沙溪鎮(zhèn)生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)園
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提供了一種L 天冬氨酸氧化酶包涵體純化復(fù)性方法，包括如下步驟：包涵體沉淀的收集,包涵體沉淀的充分洗滌，變性蛋白使用鎳柱純化,并通過將純化的變性蛋白使用緩沖液D稀釋至蛋白濃度低于1mg/ml，置于透析緩沖液中保持透析溫度為4℃，透析12小時以上，離心收集上清。最后將上清使用超濾管濃縮，再通過分子篩純化分離單體蛋白和聚集蛋白，獲得均一的天然活性蛋白。本發(fā)明解決了L 天冬氨酸氧化酶復(fù)性的問題，使用方便快捷的方法進(jìn)行L 天冬氨酸氧化酶的包涵體純化以及復(fù)性，通過包涵體的漂洗以及鎳柱純化獲得純度較高的變性蛋白，通過一步透析復(fù)性過程，逐漸去掉變性劑，蛋白折疊為有活性的蛋白分子，復(fù)性效率不低于10%。然后經(jīng)過一步透析和分子篩純化獲得有活性的高純度酶。