一種可檢測熱原的單克隆細胞系的制備方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201810317034.1 申請日 -
公開（公告）號 CN108707626B 公開（公告）日 2021-10-01
申請公布號 CN108707626B 申請公布日 2021-10-01
分類號 C12N15/867（2006.01）I;C12Q1/02（2006.01）I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 方敏;李凱莉;王滔;徐赫男;姜威;李晶;劉文軍;段學(xué)鋒 申請（專利權(quán)）人 中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院湖州營養(yǎng)與健康產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新中心
代理機構(gòu) 北京律和信知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 武玉琴;劉國偉
地址 100101北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種可檢測熱原的單克隆細胞系的制備方法。該方法主要通過慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定細胞系的方式，使得在NF?κB反應(yīng)元件或者IFN?β啟動子控制下的熒光素酶基因穩(wěn)定表達在人上皮細胞A549細胞中，然后通過流式篩選得到單克隆，進一步篩選對LPS有反應(yīng)的陽性克隆子，最后使用細菌內(nèi)毒素標(biāo)準品刺激并同時和鱟試劑進行比較，從而建立了一種新的使用上皮細胞系檢測熱原的方法。所述的上皮細胞系檢測熱原的方法不需要使用動物就能夠真實地模擬人體對熱原的反應(yīng)，并且能夠?qū)Φ姆植挤秶鷺O為廣泛的LPS有較強的反應(yīng)，靈敏度高，穩(wěn)定性好，而且A549細胞市售易得使該熱原檢測方法簡單易行。