從組織中分離胎盤間質(zhì)細(xì)胞并培養(yǎng)成間充質(zhì)干細(xì)胞的方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201710653583.1 申請日 -
公開（公告）號(hào) CN107299082A 公開（公告）日 2017-10-27
申請公布號(hào) CN107299082A 申請公布日 2017-10-27
分類號(hào) C12N5/0775(2010.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 許曉椿;陸晗燕;王正;朱業(yè)峰 申請（專利權(quán)）人 廣州中科博雅干細(xì)胞科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) - 代理人 -
地址 510663 廣東省廣州市高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)科豐路31號(hào)G2棟520號(hào)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及從組織中分離胎盤間質(zhì)細(xì)胞并培養(yǎng)成間充質(zhì)干細(xì)胞的方法，還涉及該方法中所用的混合酶消化液。具體的，所述方法包括以下步驟：胎盤小葉的處理、混合酶消化及終止、收集原代細(xì)胞、原代細(xì)胞凍存、細(xì)胞復(fù)蘇、和細(xì)胞傳代等步驟。使用本發(fā)明方法可以有效的提高從胎盤分離間充質(zhì)干細(xì)胞的效率。例如所得原代細(xì)胞是一群較純的間質(zhì)細(xì)胞(CD73表達(dá)大于60％，CD45不表達(dá))，每克組織獲取細(xì)胞數(shù)可達(dá)2.5×107，且得率穩(wěn)定，經(jīng)傳代培養(yǎng)所得間充質(zhì)干細(xì)胞的P1?P5代細(xì)胞均為間充質(zhì)干細(xì)胞，陽性表達(dá)CD73、CD90、CD105大于98％，陰性表達(dá)CD34、CD45、CD19、CD11b、HLA?DR小于2％；P5代細(xì)胞G2期細(xì)胞小于1％，增殖能力強(qiáng)，未進(jìn)入分裂期；在特異性誘導(dǎo)培養(yǎng)基刺激下，有向成骨細(xì)胞，成脂細(xì)胞，成軟骨細(xì)胞分化的能力。