一種具有高效同源定向修復(fù)活性Cas9-RNAiRNP的制備方法及應(yīng)用

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN202210216005.2 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN114672504A 公開（公告）日 2022-06-28
申請(qǐng)公布號(hào) CN114672504A 申請(qǐng)公布日 2022-06-28
分類號(hào) C12N15/70（2006.01）I;C12N15/55（2006.01）I;C12N15/113（2010.01）I;C12N9/22（2006.01）I;C12N15/88（2006.01）I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 劉奕;孫文麗;吳克;殷文浩;喬潔 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 武漢博沃生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 湖南喬熹知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 -
地址 430075湖北省武漢市東湖高新區(qū)高新大道858號(hào)生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)園中小企業(yè)園A9-2棟
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種具有高效同源定向修復(fù)活性Cas9?RNAi RNP的制備方法，其中，選擇對(duì)NHEJ途徑的關(guān)鍵蛋白Ligase 4進(jìn)行短暫抑制，通過(guò)延長(zhǎng)Cas9RNP的gRNA的3′端以構(gòu)建shRNA的類似結(jié)構(gòu)，利用大腸桿菌細(xì)胞“一步法”表達(dá)Cas9RNP技術(shù)，得到攜帶特定sgRNA?shRNA的Cas?RNAi RNP。本發(fā)明的Cas?RNAi RNP實(shí)現(xiàn)了基因編輯與RNA干擾的功能聯(lián)用，設(shè)計(jì)針對(duì)Ligase 4基因的shRNA堿基序列，以期對(duì)NHEJ途徑進(jìn)行暫時(shí)抑制，從而實(shí)現(xiàn)高效的HDR修復(fù)。