穩(wěn)定表達(dá)生物素連接酶BirA的細(xì)胞株制備方法及其應(yīng)用

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN202110288528.3 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN113061589A 公開(kāi)（公告）日 2021-07-02
申請(qǐng)公布號(hào) CN113061589A 申請(qǐng)公布日 2021-07-02
分類號(hào) C12N9/00（2006.01）I;C12N15/85（2006.01）I;C12N5/10（2006.01）I;C12P21/00（2006.01）I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 韓照中;潘紅芽 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 領(lǐng)諾（上海）醫(yī)藥科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) - 代理人 -
地址 201203上海市浦東新區(qū)蔡倫路781號(hào)607室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開(kāi)了一種穩(wěn)定表達(dá)生物素連接酶Bir A的細(xì)胞株制備方法及其在重組蛋白體內(nèi)定點(diǎn)生物素化中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了該細(xì)胞株的構(gòu)建方法及其應(yīng)用實(shí)例：將Bir A基因插入真核表達(dá)載體；轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞得到穩(wěn)定表達(dá)BirA的細(xì)胞系；構(gòu)建帶Avi?蛋白純化聯(lián)合標(biāo)簽的重組蛋白表達(dá)載體；轉(zhuǎn)染BirA細(xì)胞系用于生產(chǎn)體內(nèi)定點(diǎn)生物素化蛋白。本發(fā)明的獨(dú)特之處在于實(shí)現(xiàn)了BirA基因在真核哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)和重組蛋白體內(nèi)定點(diǎn)生物素化；選用HEK 293F為宿主細(xì)胞，便于在生產(chǎn)重組蛋白的同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)的定點(diǎn)生物素化，提高了后續(xù)進(jìn)行生物學(xué)功能檢測(cè)的效率；提供了應(yīng)用HEK 293F?Bir A細(xì)胞株生產(chǎn)體內(nèi)生物素化重組蛋白檢測(cè)、鑒定的基本方法和技術(shù)途徑。