一種不依賴于純化對PCR擴增產(chǎn)物直接進行Sanger測序的方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202011557959.7 申請日 -
公開（公告）號 CN112575071A 公開（公告）日 2021-03-30
申請公布號 CN112575071A 申請公布日 2021-03-30
分類號 C12Q1/6869;C12N15/11 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 劉金超;劉明坤;葉鋒 申請（專利權）人 北京思爾成生物技術有限公司
代理機構 北京紀凱知識產(chǎn)權代理有限公司 代理人 魏少偉
地址 100176 北京市大興區(qū)經(jīng)濟技術開發(fā)區(qū)經(jīng)海四路156號院11號樓4層401室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種不依賴于純化對PCR擴增產(chǎn)物直接進行Sanger測序的方法。本發(fā)明公開的方法包括：1)利用5’端帶有測序引物的引物對對待測DNA片段進行PCR擴增，得到擴增產(chǎn)物；2)在含有測序引物與擴增產(chǎn)物的測序反應體系中進行測序反應，得到測序產(chǎn)物；測序引物的3’端帶有不能被核酸外切酶進行切割的修飾；3)分析測序產(chǎn)物，得到待測DNA片段的序列，完成測序。本發(fā)明通過設計經(jīng)特殊修飾的測序引物，可以不經(jīng)過純化，直接對PCR擴增產(chǎn)物進行下游測序反應和測序分析，從而精簡了測序流程，縮短了測序時間，降低了操作的復雜程度，同時不需要純化試劑，降低了檢測成本，更有利于Sanger測序法在臨床樣本檢測中的應用。