用于篩選治療器官纖維化的膠原轉錄抑制劑的高通量篩選方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202011638647.9 申請日 -
公開（公告）號 CN112813132A 公開（公告）日 2021-05-18
申請公布號 CN112813132A 申請公布日 2021-05-18
分類號 C12Q1/02;G01N21/64 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 王陽;柏旭 申請（專利權）人 廈門市博瑞來醫(yī)藥科技有限公司
代理機構 合肥市上嘉專利代理事務所（普通合伙） 代理人 李璐
地址 361026 福建省廈門市海滄區(qū)翁角西路2036號廈門生物醫(yī)藥產業(yè)園A19號樓第4層
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種用于篩選治療器官纖維化的膠原轉錄抑制劑的高通量篩選方法，其特征在于，包括以下步驟：克隆人Col1A1、Col1A2、Col3A1啟動子?2000?100區(qū)域，單獨或聯(lián)合插入pGL3?basic報告基因載體，經轉化DH5α菌和質粒提取得到用于轉染的質粒；將得到的質粒分別與內參pRL?TK質粒轉染成纖維細胞，后加入TGF?β1激活；或同時加入TGFβR抑制劑；激活后按照熒光素酶報告基因檢測試劑盒進行處理，酶標儀讀取化學發(fā)光數(shù)據(jù)，得出對TGF?β1誘導的膠原合成敏感的質粒，以上結果證實了該種篩選方法的實用性。還公開了利用該方法在測定抑制I/III型膠原轉錄藥物的藥效定量分析中的應用。