一種構(gòu)建小鼠TCRbetaCDR3區(qū)文庫的方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201710985239.2 申請日 -
公開（公告）號 CN107858400A 公開（公告）日 2018-03-30
申請公布號 CN107858400A 申請公布日 2018-03-30
分類號 C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 于海禮;吳海陽;袁江北;仇鑫;譚穎 申請（專利權(quán)）人 重慶天科雅生物科技有限公司
代理機構(gòu) 重慶上義眾和專利代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 重慶天科雅生物科技有限公司
地址 400084 重慶市大渡口區(qū)春暉路街道翠柏路101號5幢1001-1004
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及一種構(gòu)建小鼠TCR beta CDR3區(qū)測序文庫的方法，主要步驟包括：(1)提取小鼠組織或全血總RNA。(2)逆轉(zhuǎn)錄RNA為cDNA，將接頭序列連接到長鏈cDNA末端，通過通用C端引物和接頭序列引物擴增包含CDR3區(qū)的TCR beta。(3)通過Tn5轉(zhuǎn)座酶打斷TCR beta并富集CDR3區(qū)序列。(4)通過illumina高通量測序平臺進行測序。本方法適用于含有各類T細胞的組織，體液等樣本的建庫；采用5’RACE技術(shù)，可高效的無偏差的對小鼠TCR beta進行擴增，克服了多重PCR擴增所引起的模板拷貝數(shù)和擴增效率難以控制，產(chǎn)物發(fā)生偏移等問題；利用Tn5酶能將DNA打斷和接頭連接同步完成的功能和使用特異性的引物可對TCR beta的高度可變區(qū)(CDR3區(qū))進行快速準(zhǔn)確的富集建庫，使測序更有針對性，方便數(shù)據(jù)分析，節(jié)約測序成本。