一種基于高通量測(cè)序構(gòu)建人TCRA文庫(kù)的多重PCR引物及方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201610821739.8 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN106319064A 公開(kāi)（公告）日 2017-01-11
申請(qǐng)公布號(hào) CN106319064A 申請(qǐng)公布日 2017-01-11
分類(lèi)號(hào) C12Q1/68(2006.01)I;C12N15/11(2006.01)I;C40B50/06(2006.01)I 分類(lèi) 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 范盤(pán)生;李仁強(qiáng);于海禮 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人 重慶天科雅生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 北京中濟(jì)緯天專(zhuān)利代理有限公司 代理人 譚勇
地址 102206 北京市昌平區(qū)回龍壩鎮(zhèn)中關(guān)村生命科學(xué)園生命園路8號(hào)院一區(qū)1號(hào)樓3層332室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公布了一套基于高通量測(cè)序技術(shù)的多重PCR引物組合及方法，用該方法來(lái)擴(kuò)增人T淋巴細(xì)胞群TCRA基因mRNA，對(duì)擴(kuò)增子文庫(kù)進(jìn)行測(cè)序以產(chǎn)生T細(xì)胞受體庫(kù)的免疫應(yīng)答譜，了解免疫狀態(tài)并揭示發(fā)病機(jī)制。具體為以mRNA為模版高覆蓋的擴(kuò)增T淋巴細(xì)胞TCRA基因CDR3區(qū)域，同時(shí)獲得VJC片段的組合信息。構(gòu)建TCRA基因擴(kuò)增子文庫(kù)的引物包括：正向引物一組共46個(gè)，通過(guò)一一對(duì)應(yīng)或簡(jiǎn)并方式覆蓋70個(gè)V片段；反向引物一組共32個(gè)，由測(cè)序接頭、key序列、barcode編碼及TRAC特異性反向互補(bǔ)序列串聯(lián)組成，其中barcode序列分為32種，可在一次測(cè)序?qū)嶒?yàn)中測(cè)序32個(gè)樣本。通過(guò)該種方法，可以有效的擴(kuò)增全部70個(gè)有功能的TRAV片段，同時(shí)對(duì)TRAJ片段實(shí)現(xiàn)無(wú)偏差擴(kuò)增，為免疫組學(xué)的基礎(chǔ)及臨床研究提供幫助。