篩選超低巖藻糖細(xì)胞系的方法和應(yīng)用

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201610194325.7 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN106167525B 公開(kāi)（公告）日 2019-03-19
申請(qǐng)公布號(hào) CN106167525B 申請(qǐng)公布日 2019-03-19
分類(lèi)號(hào) C07K16/00;C07K16/46;C12N15/85;C12N5/10;A61K39/395 分類(lèi) 有機(jī)化學(xué)〔2〕;
發(fā)明人 朱曉東;張海濤 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人 北京軒竹康明生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 北京超凡志成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 吳開(kāi)磊
地址 100176 北京市北京經(jīng)濟(jì)技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)科創(chuàng)六街88號(hào)孵化樓509室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 篩選超低巖藻糖細(xì)胞系的方法和應(yīng)用,本發(fā)明提供了構(gòu)建表達(dá)抗體和IgG?Fc融合蛋白巖藻糖缺陷型的宿主細(xì)胞方法及抗體和IgG?Fc融合蛋白巖藻糖活性的檢測(cè)方法，及此類(lèi)細(xì)胞株的具體應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)TALEN（和/或CRISPR）技術(shù)高效敲除生產(chǎn)抗體或IgG?Fc融合蛋白工程細(xì)胞中的巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶（FUT8）基因的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)，通過(guò)小扁豆凝集素（LCA）加壓、基因測(cè)序、流式細(xì)胞儀篩選方法，獲得巖藻糖高效敲除的宿主細(xì)胞。并將巖藻糖缺陷的CHOK1宿主細(xì)胞株構(gòu)建成表達(dá)抗體蛋白的穩(wěn)定工程細(xì)胞株，獲得抗體蛋白后進(jìn)行糖型分析，結(jié)果表明巖藻糖敲除效率達(dá)99％以上。