以CA19-9 cDNA片段為模板制備RNA探針的方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201610083165.9 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN105567845B 公開（公告）日 2020-05-01
申請(qǐng)公布號(hào) CN105567845B 申請(qǐng)公布日 2020-05-01
分類號(hào) C12Q1/6811;C12Q1/6886;C12N15/11;C12N15/10 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 徐學(xué)明;魯隼;馮俊清 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 廣州復(fù)能基因有限公司
代理機(jī)構(gòu) 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 代理人 張瑩
地址 510663 廣東省廣州市廣州科學(xué)城國際企業(yè)孵化器D區(qū)8樓
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提供了一種以CA19?9 cDNA為模板制備RNA探針的方法。該方法包括以下步驟：針對(duì)CA19?9 mRNA序列篩選多個(gè)靶序列，對(duì)于每個(gè)靶序列設(shè)計(jì)至少一對(duì)引物，所述引物的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為多重DNA片段，所述多重DNA片段能包括所有靶序列；從CA19?9 cDNA質(zhì)粒中，采用上述引物，通過PCR擴(kuò)增得到所述多重DNA片段，純化后混合，作為模板；加入RNA聚合酶和帶有生物素標(biāo)記的UTP進(jìn)行反應(yīng)，將UTP摻入產(chǎn)物，純化后得到RNA探針。本發(fā)明得到的cRNA探針能夠全部覆蓋所有靶序列，簡化了探針制備步驟，大幅度縮短整個(gè)實(shí)驗(yàn)時(shí)間，探針特異性更高，穩(wěn)定性更強(qiáng)，背景信號(hào)更低且靈敏度更高。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明提供了一種快速檢測胰腺癌相關(guān)的CA19?9表達(dá)的試劑盒。