體外高效擴增NK和轉(zhuǎn)染NKG2D活化NK細胞的方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202110565482.5 申請日 -
公開（公告）號 CN113337464A 公開（公告）日 2021-09-03
申請公布號 CN113337464A 申請公布日 2021-09-03
分類號 C12N5/0783（2010.01）I;C12N5/10（2006.01）I;C12N15/85（2006.01）I;C12N15/65（2006.01）I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 徐健;李陶;張揚 申請（專利權(quán)）人 浙江圣希澳醫(yī)學(xué)科技有限公司
代理機構(gòu) 北京盛凡佳華專利代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 孫瑞峰
地址 322399浙江省金華市磐安縣安文街道環(huán)城北路18號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，細胞治療技術(shù)范疇，具體是體外高效擴增NK和轉(zhuǎn)染NKG2D活化NK細胞的方法。包括具體方法為：NK細胞體外高效擴增技術(shù)優(yōu)化及NK免疫生物學(xué)特性檢測；應(yīng)用RT?PCR方法檢測腫瘤細胞及腫瘤組織中NKG2D配體MICA，ULBP 1,2,3的mRNA表達；NKG2D克隆載體的構(gòu)建；NKG2D真核表達載體的構(gòu)建；真核表達載體在CHO細胞中的表達及鑒定；真核表達載體轉(zhuǎn)染NK細胞及對NK細胞生物學(xué)功能影響。本發(fā)明提供一種利用基因工程技術(shù)構(gòu)建pEGFP?N1/NKG2D真核熒光表達載體，將構(gòu)建好的pEGFP?N1/NKG2D質(zhì)粒轉(zhuǎn)染NK細胞，應(yīng)用MTT方法檢測NKG2D轉(zhuǎn)染前后NK細胞增殖情況和對腫瘤細胞系的殺傷效應(yīng)，RT?PCR方法檢測相關(guān)殺傷分子IL?2、TNF?a、Perforin、TWEAK的mRNA表達水平，為腫瘤治療提供新思路的體外高效擴增NK和轉(zhuǎn)染NKG2D活化NK細胞的方法。