一種利用大腸桿菌發(fā)酵制備小干擾RNA分子的方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN03129043.4 申請日 -
公開（公告）號 CN1458279A 公開（公告）日 2003-11-26
申請公布號 CN1458279A 申請公布日 2003-11-26
分類號 C12P19/34;C12N15/70 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 錢志康;宣寶琴;李琳;徐劍鋒;譚暢;閔太善;王維榮;謝承光;沈水源;程小偉;史順成;黃偉達(dá) 申請（專利權(quán)）人 上海恒達(dá)科技發(fā)展股份有限公司
代理機構(gòu) 上海正旦專利代理有限公司 代理人 復(fù)旦大學(xué);上海復(fù)旦新楊生物科技有限責(zé)任公司;上海恒達(dá)科技發(fā)展股份有限公司
地址 200433上海市邯鄲路220號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及一種利用大腸桿菌發(fā)酵大規(guī)模制備RNA干擾用小干擾RNA分子的新方法。本發(fā)明構(gòu)建了長雙鏈RNA表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌宿主菌，通過大規(guī)模發(fā)酵，用堿－SDS法抽提發(fā)酵菌體得到全RNA和質(zhì)粒DNA的混合物。該混合物用CF－11柱進(jìn)行純化得到長雙鏈RNA。最后利用大腸桿菌III型RNA酶將長雙鏈RNA切成12－30bp的小干擾RNA。得到的siRNA用分光光度法檢測其純度與濃度，OD260/OD280＝1.978，表明樣品的純度相當(dāng)高。每100g大腸桿菌菌體得到siRNA樣品約為210mg。