一種單細(xì)胞RNA逆轉(zhuǎn)錄與文庫構(gòu)建的方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201810019044.7 申請日 -
公開（公告）號 CN108103055A 公開（公告）日 2018-06-01
申請公布號 CN108103055A 申請公布日 2018-06-01
分類號 C12N15/10;C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 胡春旭;陸思嘉;任軍 申請（專利權(quán)）人 上海億康醫(yī)學(xué)檢驗所有限公司
代理機(jī)構(gòu) 北京品源專利代理有限公司 代理人 上海億康醫(yī)學(xué)檢驗所有限公司
地址 201400 上海市奉賢區(qū)望園路1698弄26號17幢
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明屬于轉(zhuǎn)錄組分析領(lǐng)域，涉及到一種快速進(jìn)行單細(xì)胞RNA逆轉(zhuǎn)錄與文庫構(gòu)建的方法。本發(fā)明能在5?6小時內(nèi),由1?2000個細(xì)胞或10pg?20ng經(jīng)提取的真核生物總RNA為起始，擴(kuò)增出20?500ng高質(zhì)量全長雙鏈cDNA，并獲得符合下游分析要求的高質(zhì)量cDNA文庫。此發(fā)明有效避免了cDNA合成過程中的3’偏好性和基因組DNA的污染，表達(dá)定量分子標(biāo)簽可輔助基因表達(dá)量計算，同時在完整擴(kuò)增RNA序列信息的同時該表達(dá)定量分子標(biāo)簽還可保留鏈來源信息。本發(fā)明可獲得95％以上的逆轉(zhuǎn)錄與擴(kuò)增建庫成功率，cDNA文庫可無縫銜接Illumina主流測序平臺，下機(jī)數(shù)據(jù)(5M Reads)可檢測到90％以上的基因表達(dá)，基因表達(dá)一致性超過90％，擴(kuò)增無明顯偏倚，且需要的樣本投入量更少。