一種高性能M?MLV逆轉(zhuǎn)錄酶的制備方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201710253825.8 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN106906237A 公開(kāi)（公告）日 2017-06-30
申請(qǐng)公布號(hào) CN106906237A 申請(qǐng)公布日 2017-06-30
分類(lèi)號(hào) C12N15/70;C12N9/12 分類(lèi) 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 李京;高嵩;陳祉月;羅志丹;龔雪梅;張惠銘;張羽;潘綺雯 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人 江蘇愚公生命科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 連云港潤(rùn)知專(zhuān)利代理事務(wù)所 代理人 淮海工學(xué)院;江蘇愚公生命科技有限公司
地址 222000 江蘇省連云港市海州區(qū)通灌南路108號(hào)淮海工學(xué)院海洋藥物研究院高嵩轉(zhuǎn)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明是一種高性能M?MLV逆轉(zhuǎn)錄酶的制備方法，包括突變體克隆構(gòu)建，所構(gòu)建的突變體質(zhì)粒序列均經(jīng)過(guò)測(cè)序確認(rèn)，得到17個(gè)突變體質(zhì)粒；然后進(jìn)行突變體的篩選：將野生型pET28b?M?MLV和17個(gè)突變體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞中，培養(yǎng)、誘導(dǎo)突變酶表達(dá)；收集菌體獲得突變酶粗提液；選擇有蛋白表達(dá)的突變酶粗提液，在不同溫度下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄活性篩選：將活性篩選結(jié)果陽(yáng)性的突變體在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)、誘導(dǎo)蛋白表達(dá)；收集菌體純化得到M?MLV逆轉(zhuǎn)錄酶。本發(fā)明方法采用分子理性設(shè)計(jì)與功能篩選相結(jié)合，在較小范圍內(nèi)篩選即獲得高熱穩(wěn)定性M?MLV逆轉(zhuǎn)錄酶，其熱穩(wěn)定性達(dá)到耐熱能力65°C。