用于表達限制性內(nèi)切酶SacI的甲基化保護菌株的篩選方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201710764317.6 申請日 -
公開（公告）號 CN107557372A 公開（公告）日 2018-01-09
申請公布號 CN107557372A 申請公布日 2018-01-09
分類號 C12N15/54(2006.01)I;C12N15/74(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 張坤曉;龔雪梅;韓挺翰;許恒皓 申請（專利權）人 江蘇愚公生命科技有限公司
代理機構 連云港潤知專利代理事務所 代理人 江蘇愚公生命科技有限公司
地址 222000 江蘇省連云港市海州區(qū)花果山大道17-1-1005至1006
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明是一種用于表達限制性內(nèi)切酶SacI的甲基化保護菌株的篩選方法，它通過甲基轉(zhuǎn)移酶M.AluI的重組表達菌株的建立、限制酶SacI的重組表達等步驟，將測序正確的重組表達質(zhì)粒pBAD?R.SacI轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞進行篩選培養(yǎng)，獲得限制酶SacI的重組表達菌株；該菌株經(jīng)擴大培養(yǎng)后，以阿拉伯糖誘導，獲得限制酶SacI的重組蛋白。本發(fā)明方法實現(xiàn)了限制酶SacI的高效重組表達；利用阿拉伯糖操縱子表達系統(tǒng)對本底表達的嚴苛控制進行限制酶SacI的重組表達；抵抗限制酶SacI對宿主基因組DNA的酶切，方法穩(wěn)定且高效；篩選出的M.AluI甲基化保護菌株同樣可應用于其他具有類似識別位點的限制酶的重組表達。