用于表達(dá)限制性內(nèi)切酶SacI的甲基化保護(hù)菌株的篩選方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201710764317.6 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN107557372A 公開（公告）日 2018-01-09
申請(qǐng)公布號(hào) CN107557372A 申請(qǐng)公布日 2018-01-09
分類號(hào) C12N15/54(2006.01)I;C12N15/74(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 張坤曉;龔雪梅;韓挺翰;許恒皓 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 江蘇愚公生命科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 連云港潤知專利代理事務(wù)所 代理人 江蘇愚公生命科技有限公司
地址 222000 江蘇省連云港市海州區(qū)花果山大道17-1-1005至1006
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明是一種用于表達(dá)限制性內(nèi)切酶SacI的甲基化保護(hù)菌株的篩選方法，它通過甲基轉(zhuǎn)移酶M.AluI的重組表達(dá)菌株的建立、限制酶SacI的重組表達(dá)等步驟，將測(cè)序正確的重組表達(dá)質(zhì)粒pBAD?R.SacI轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行篩選培養(yǎng)，獲得限制酶SacI的重組表達(dá)菌株；該菌株經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后，以阿拉伯糖誘導(dǎo)，獲得限制酶SacI的重組蛋白。本發(fā)明方法實(shí)現(xiàn)了限制酶SacI的高效重組表達(dá)；利用阿拉伯糖操縱子表達(dá)系統(tǒng)對(duì)本底表達(dá)的嚴(yán)苛控制進(jìn)行限制酶SacI的重組表達(dá)；抵抗限制酶SacI對(duì)宿主基因組DNA的酶切，方法穩(wěn)定且高效；篩選出的M.AluI甲基化保護(hù)菌株同樣可應(yīng)用于其他具有類似識(shí)別位點(diǎn)的限制酶的重組表達(dá)。