一種利用熒光定量PCR檢測多基因位點突變的方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202210161982.7 申請日 -
公開（公告）號 CN114317697A 公開（公告）日 2022-04-12
申請公布號 CN114317697A 申請公布日 2022-04-12
分類號 C12Q1/6858 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 周文剛;崔帆 申請（專利權(quán)）人 上海君遠生物科技有限公司
代理機構(gòu) 北京深川專利代理事務所（普通合伙） 代理人 張彥
地址 200000 上海市浦東新區(qū)慶達路315號21幢4層
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及一種利用熒光定量PCR檢測多基因位點突變的方法，所述方法包括正向特異引物、反向特異引物和特異性熒光探針，其中，所述正向特異引物的長度為15?25個堿基，其序列和待測序列一條鏈互補；所述反向特異引物的長度為15?25個堿基，其序列和待測序列的另一條鏈互補，所述的正向特異引物和反向特異引物的Tm值均為50?65℃，且二者的Tm值的差≤5℃；所述特異性熒光探針的長度為35?50個堿基，其序列和野生型待測序列互補，包括Blocker部分和Reporter部分，所述特異性熒光探針的Tm值比正向特異性引物的Tm值高15?25℃?？朔爽F(xiàn)有技術(shù)的不足，采用本發(fā)明的特殊引物、探針結(jié)構(gòu)，能夠顯著減少非特異性擴增，提高了區(qū)別野生型和突變型序列的能力，其檢測靈敏度可低至0.01％。