一種二代高通量測序的不對稱DNA雙鏈接頭及其應(yīng)用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201010544306.5 申請日 -
公開（公告）號 CN102061335B 公開（公告）日 2014-07-23
申請公布號 CN102061335B 申請公布日 2014-07-23
分類號 C12Q1/68(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 李軒;郝沛;潘小寶;黃凱 申請（專利權(quán)）人 上海因可科技有限公司
代理機構(gòu) 南京眾聯(lián)專利代理有限公司 代理人 趙楓
地址 215125 江蘇省蘇州市工業(yè)園區(qū)星湖街218號生物納米園A2樓426單元
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 一種二代高通量測序的不對稱DNA雙鏈接頭，由兩個DNA寡核苷酸單鏈組成，其制備方法如下：將所述兩個DNA寡核苷酸單鏈溶于淬火溶液中，調(diào)整最終濃度達到2mM，體積20微升，然后利用下述條件進行淬火反應(yīng)，形成局部互補的DNA雙鏈接頭：95℃5min；95℃降到12℃，每秒0.1℃；保持在12℃，將退火后的接頭溶液1∶4稀釋到500μM，并在-20℃保存。其應(yīng)用采用如下流程：A、不對稱DNA接頭與DNA樣本的連接反應(yīng)：B、電泳割膠純化分離未連接的DNA雙鏈接頭：C、判斷D、基于不對稱序列的PCR放大反應(yīng)：本發(fā)明的顯著優(yōu)勢：1)建庫起始DNA樣品用量低至50納克、靈敏度提高達100倍2)建庫的接頭連接過程可產(chǎn)生100％的有效測序樣本等。