一種用于NGS平臺的尿液外泌體RNA提取和文庫構(gòu)建方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202110002459.5 申請日 -
公開（公告）號 CN112662739A 公開（公告）日 2021-04-16
申請公布號 CN112662739A 申請公布日 2021-04-16
分類號 C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 許明炎;張曉妮;李慧;林郁松 申請（專利權(quán)）人 深圳海普洛斯醫(yī)學檢驗實驗室
代理機構(gòu) 北京高沃律師事務所 代理人 薛紅凡
地址 518000 廣東省深圳市南山區(qū)西麗街道松坪山路1號源興科技大廈南座1106
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提供了一種用于NGS平臺的尿液外泌體RNA提取和文庫構(gòu)建方法，屬于醫(yī)學和生物技術(shù)領(lǐng)域。通過添加助沉試劑到尿液中實現(xiàn)外泌體有效沉降，解決RNA材料受限的問題，同時采用Trizol試劑直接對外泌體進行RNA提取且去除回溶、純化步驟，減少RNA在提取中損失和降解，為后續(xù)建庫提供合格原料。通過修復cDNA損傷，優(yōu)化末端修復加A、純化步驟，以及文庫擴增反應循環(huán)數(shù)，使用高保真酶預混液進行PCR擴增進行建庫，該文庫保存了外泌體分子多樣性，為NGS技術(shù)在液體活檢和診斷的應用提供可靠樣本。該方法有效解決了尿液樣本外泌體含量低，提取RNA總量低，無法有效建庫，利用NGS平臺測序的難題。