一種擴(kuò)增子測序添加唯一性標(biāo)識符的方法及應(yīng)用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202111646690.4 申請日 -
公開（公告）號 CN114277114A 公開（公告）日 2022-04-05
申請公布號 CN114277114A 申請公布日 2022-04-05
分類號 C12Q1/6869（2018.01）I;C12N15/11（2006.01）I;C40B50/06（2006.01）I;C12Q1/6806（2018.01）I;C12Q1/6858（2018.01）I;C12Q1/6886（2018.01）I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 許明炎;張曉妮;周書雄 申請（專利權(quán)）人 深圳海普洛斯醫(yī)學(xué)檢驗實驗室
代理機(jī)構(gòu) 深圳鼎合誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 李小焦;彭家恩
地址 518000廣東省深圳市南山區(qū)西麗街道松坪山路1號源興科技大廈南座1106
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本申請公開了一種擴(kuò)增子測序添加唯一性標(biāo)識符的方法及應(yīng)用。本申請方法包括，用第一引物對模板核酸進(jìn)行一次延伸；第一引物包括平臺上游引物結(jié)合區(qū)、UMI和靶標(biāo)上游引物序列，且平臺上游引物結(jié)合區(qū)和靶標(biāo)上游引物序列的T替換為dU；然后，向反應(yīng)體系加入第二引物進(jìn)行一次延伸；第二引物包括平臺下游引物結(jié)合區(qū)和靶標(biāo)下游引物序列；然后，向反應(yīng)體系加入UDG/UNG酶消化dU；消化后，向反應(yīng)體系加入第三引物進(jìn)行PCR；第三引物為第一引物平臺上游引物結(jié)合區(qū)序列。本申請方法，通過對引物進(jìn)行特殊設(shè)計，依序向反應(yīng)體系中加入三種引物，實現(xiàn)使每個原始模板核酸只對應(yīng)一個UMI，校正每個靶點擴(kuò)增性偏差，實現(xiàn)靶標(biāo)基因拷貝數(shù)定量檢測。