先將片段進(jìn)行融合然后轉(zhuǎn)化構(gòu)成載體的構(gòu)建方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201811586556.8 申請日 -
公開（公告）號 CN109652446A 公開（公告）日 2019-04-19
申請公布號 CN109652446A 申請公布日 2019-04-19
分類號 C12N15/84（2006.01）I; C12N15/65（2006.01）I; C12N15/11（2006.01）I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 米鐵柱; 張國棟; 劉佳音; 鄒丹丹; 徐春瑩; 羅碧; 劉洋 申請（專利權(quán)）人 青島袁策集團有限公司
代理機構(gòu) 北京華仁聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 青島袁策集團有限公司
地址 266000 山東省青島市李滄區(qū)金水路171號青島國際院士港16號樓
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本申請公開了一種先將片段進(jìn)行融合然后轉(zhuǎn)化構(gòu)成載體的構(gòu)建方法，包括以下步驟：A、提取待轉(zhuǎn)化作物DNA；B、分別獲得多種連鎖基因表達(dá)盒；C、獲取去除Hpt基因的pCAMBIA1300質(zhì)粒的；D、各個表達(dá)盒的連接；E、融合片段與pCAMBIA1300?hpt?質(zhì)粒的連接。進(jìn)一步包括：構(gòu)建雙T?DNA載體，其中一個T?DNA區(qū)含有三連鎖基因，另一個T?DNA區(qū)含有抗性基因，用于愈傷轉(zhuǎn)化及植株再生階段的篩選；所述三連鎖基因分別為：DsRed基因、EAT1基因、ZmAA基因。本發(fā)明提供了一種基于DsRED熒光蛋白基因為報告基因的不含潮霉素抗性基因的工程菌株。本發(fā)明還提供了一種將片段進(jìn)行融合，然后轉(zhuǎn)化載體的一種實驗新思路。