CL7蛋白質(zhì)、高活性重組TET酶CL7-NgTET1、其原核表達(dá)載體及應(yīng)用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202111476804.5 申請日 -
公開（公告）號 CN114107252A 公開（公告）日 2022-03-01
申請公布號 CN114107252A 申請公布日 2022-03-01
分類號 C12N9/22（2006.01）I;C12N9/02（2006.01）I;C12N15/70（2006.01）I;C12Q1/25（2006.01）I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 宋東亮;韋磊;鄔升楊;李婕;劉倩;曹振;江翱;黃開瑜 申請（專利權(quán)）人 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
代理機(jī)構(gòu) 蘇州根號專利代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 朱華慶
地址 200120上海市浦東新區(qū)天雄路166弄1號樓402室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提供一種屏蔽核酸酶活性的CL7蛋白質(zhì)，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。還公開了一種高活性重組TET酶CL7?NgTET1，其氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，及其原核表達(dá)載體，其結(jié)構(gòu)為：pET28A?N6H?MBP?CL7?NgTET1，還公開了其在酶轉(zhuǎn)化法檢測DNA甲基化中的應(yīng)用。本發(fā)明在NgTET1基礎(chǔ)上進(jìn)行了設(shè)計和改造，通過融合CL7 domain獲得了CL7?NgTET1重組融合蛋白。該重組融合蛋白能夠顯著提高TET蛋白對5mC的氧化能力，提高了該酶的體外生物活力。通過在載體N端引入MBP融合蛋白，可在原核系統(tǒng)中表達(dá)，從而極大提高可溶蛋白的產(chǎn)量，從而同時解決了TET酶產(chǎn)量低和酶活低的問題，也極大縮短了生產(chǎn)周期及降低成本。