CL7蛋白質(zhì)、高活性重組TET酶CL7-NgTET1、其原核表達(dá)載體及應(yīng)用
基本信息
| 申請(qǐng)?zhí)?/td> | CN202111476804.5 | 申請(qǐng)日 | - |
| 公開(kāi)（公告）號(hào) | CN114107252A | 公開(kāi)（公告）日 | 2022-03-01 |
| 申請(qǐng)公布號(hào) | CN114107252A | 申請(qǐng)公布日 | 2022-03-01 |
| 分類號(hào) | C12N9/22（2006.01）I;C12N9/02（2006.01）I;C12N15/70（2006.01）I;C12Q1/25（2006.01）I | 分類 | 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程; |
| 發(fā)明人 | 宋東亮;韋磊;鄔升楊;李婕;劉倩;曹振;江翱;黃開(kāi)瑜 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 | 翌圣生物科技（上海）股份有限公司 |
| 代理機(jī)構(gòu) | 蘇州根號(hào)專利代理事務(wù)所（普通合伙） | 代理人 | 朱華慶 |
| 地址 | 200120上海市浦東新區(qū)天雄路166弄1號(hào)樓402室 | ||
| 法律狀態(tài) | - | ||
摘要
| 摘要 | 本發(fā)明提供一種屏蔽核酸酶活性的CL7蛋白質(zhì)，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。還公開(kāi)了一種高活性重組TET酶CL7?NgTET1，其氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，及其原核表達(dá)載體，其結(jié)構(gòu)為：pET28A?N6H?MBP?CL7?NgTET1，還公開(kāi)了其在酶轉(zhuǎn)化法檢測(cè)DNA甲基化中的應(yīng)用。本發(fā)明在NgTET1基礎(chǔ)上進(jìn)行了設(shè)計(jì)和改造，通過(guò)融合CL7 domain獲得了CL7?NgTET1重組融合蛋白。該重組融合蛋白能夠顯著提高TET蛋白對(duì)5mC的氧化能力，提高了該酶的體外生物活力。通過(guò)在載體N端引入MBP融合蛋白，可在原核系統(tǒng)中表達(dá)，從而極大提高可溶蛋白的產(chǎn)量，從而同時(shí)解決了TET酶產(chǎn)量低和酶活低的問(wèn)題，也極大縮短了生產(chǎn)周期及降低成本。 |
