重組T4連接酶突變體、編碼DNA及NGS建庫方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202111336097.X 申請日 -
公開（公告）號 CN113774032B 公開（公告）日 2022-03-01
申請公布號 CN113774032B 申請公布日 2022-03-01
分類號 C12N9/00（2006.01）I;C12N15/52（2006.01）I;C12Q1/6806（2018.01）I;C40B50/06（2006.01）I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 宋東亮;陳晶晶;江翱;孫睿;侯策;王嫚;劉倩;曹振 申請（專利權(quán)）人 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
代理機(jī)構(gòu) 蘇州根號專利代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 朱華慶
地址 200120上海市浦東新區(qū)天雄路166弄1號樓402室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明在野生型T4DL的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了Q19K、L63T、E88R、P127K、K159S、K225A、F233A、A237R、D371W、E440K、T451K、D452P多個(gè)點(diǎn)突變；在突變體的兩端包含兩個(gè)雙鏈DNA結(jié)合域；雙鏈DNA結(jié)合域與T4DL之間的連接使用多肽橋。最終獲得了一系列低偏好性和高效率的重組DNA連接酶突變體T4DLm。并公開了其編碼DNA和NGS建庫方法。T4DLm在平末端連接上具有顯著的優(yōu)勢，連接效率高達(dá)95%，且偏好性極低。利用T4DLm開發(fā)了高效簡便的新型NGS建庫技術(shù)，具有耗時(shí)短、文庫產(chǎn)量更高、均一性更好、文庫自連更低、捕獲測序數(shù)據(jù)覆蓋深度更好等明顯的優(yōu)勢，非常適用于臨床樣本的NGS檢測，尤其是腫瘤樣本的檢測。