腫瘤相關(guān)基因甲基化檢測(cè)建庫(kù)方法及應(yīng)用

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201810176374.7 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN108410969A 公開（公告）日 2018-08-17
申請(qǐng)公布號(hào) CN108410969A 申請(qǐng)公布日 2018-08-17
分類號(hào) C12Q1/6869;C40B50/06 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 方圓 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 上海渥恩生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 北京維正專利代理有限公司 代理人 上海渥恩生物科技有限公司
地址 201700 上海市青浦區(qū)城中西路111號(hào)4幢三層C區(qū)344室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了腫瘤相關(guān)基因甲基化檢測(cè)建庫(kù)方法及應(yīng)用，該方法使用內(nèi)側(cè)引物對(duì)，采用多重PCR法進(jìn)行第一輪擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物序列分別為DNA轉(zhuǎn)化的正鏈和負(fù)鏈，內(nèi)側(cè)引物5’端使用與外側(cè)引物3’端互補(bǔ)的20~25個(gè)堿基，3’端使用根據(jù)目標(biāo)靶點(diǎn)外側(cè)的序列所設(shè)計(jì)的特異性引物序列，然后使用illumina Multiplexing PCR Primer 1.0為外側(cè)引物F和使用3’端截?cái)嗪蟮膇llumina RNA PCR Primer為外側(cè)引物R進(jìn)行第二輪擴(kuò)增，從而構(gòu)建文庫(kù)。采用本方法可同時(shí)富集多個(gè)腫瘤相關(guān)基因，所需樣本起始量超低，測(cè)序成本較低，通過(guò)雙鏈擴(kuò)增和二代測(cè)序分析，可剔除轉(zhuǎn)化效率問(wèn)題導(dǎo)致的假陽(yáng)性，提高ctDNA檢出率。