腫瘤相關(guān)基因甲基化檢測建庫方法及應(yīng)用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201810176374.7 申請日 -
公開（公告）號 CN108410969A 公開（公告）日 2018-08-17
申請公布號 CN108410969A 申請公布日 2018-08-17
分類號 C12Q1/6869;C40B50/06 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 方圓 申請（專利權(quán)）人 上海渥恩生物科技有限公司
代理機構(gòu) 北京維正專利代理有限公司 代理人 上海渥恩生物科技有限公司
地址 201700 上海市青浦區(qū)城中西路111號4幢三層C區(qū)344室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了腫瘤相關(guān)基因甲基化檢測建庫方法及應(yīng)用，該方法使用內(nèi)側(cè)引物對，采用多重PCR法進行第一輪擴增，擴增產(chǎn)物序列分別為DNA轉(zhuǎn)化的正鏈和負鏈，內(nèi)側(cè)引物5’端使用與外側(cè)引物3’端互補的20~25個堿基，3’端使用根據(jù)目標(biāo)靶點外側(cè)的序列所設(shè)計的特異性引物序列，然后使用illumina Multiplexing PCR Primer 1.0為外側(cè)引物F和使用3’端截斷后的illumina RNA PCR Primer為外側(cè)引物R進行第二輪擴增，從而構(gòu)建文庫。采用本方法可同時富集多個腫瘤相關(guān)基因，所需樣本起始量超低，測序成本較低，通過雙鏈擴增和二代測序分析，可剔除轉(zhuǎn)化效率問題導(dǎo)致的假陽性，提高ctDNA檢出率。