一種人源化膠原蛋白制備工藝和方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN202110252835.6 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN113151342A 公開(kāi)（公告）日 2021-07-23
申請(qǐng)公布號(hào) CN113151342A 申請(qǐng)公布日 2021-07-23
分類(lèi)號(hào) C12N15/81（2006.01）I;C12N15/66（2006.01）I;C12N15/12（2006.01）I;C07K14/78（2006.01）I;C07K1/34（2006.01）I;C07K1/18（2006.01）I;C07K1/36（2006.01）I;C12R1/84（2006.01）N 分類(lèi) 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 尹鴻萍;劉永軍;樂(lè)龍;張健;貢艷;馮瑞茹;胡紹顯;邵青青 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人 江蘇艾洛特醫(yī)藥研究院有限公司
代理機(jī)構(gòu) - 代理人 -
地址 211500江蘇省南京市江北新區(qū)中山科技園博富路9號(hào)15幢第二層
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種人源化膠原蛋白制備工藝和方法，包括以下步驟；（1）制備質(zhì)粒：優(yōu)選人源蛋白中的II型和III型膠原蛋白基因螺旋區(qū)的DNA片段，利用PCR技術(shù)將DNA片段進(jìn)行密碼子優(yōu)化和拼接重組，利用引物上加入的NcoI和Xho I的酶切位點(diǎn)，加入相應(yīng)的限制性?xún)?nèi)切酶將基因片段切成粘性末端，并與相應(yīng)酶切處理過(guò)的pET32a的表達(dá)載體共孵育，（2）轉(zhuǎn)化：將步驟（1）制備的質(zhì)粒與畢赤酵母進(jìn)行混合進(jìn)行轉(zhuǎn)化，獲得轉(zhuǎn)化后菌落；（3）多拷貝插入重組子的篩選：將步驟（2）轉(zhuǎn)化后的菌落進(jìn)行進(jìn)一步培養(yǎng)，篩選轉(zhuǎn)化子；（4）發(fā)酵：將步驟（3）篩選的轉(zhuǎn)化子接種后進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)獲得發(fā)酵液；（5）純化：將步驟（4）得到的發(fā)酵液依次進(jìn)行固液分離、過(guò)濾、濃縮和離子交換層析得到產(chǎn)品。