一種可去除隨機整合的位點特異性整合載體及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201410073055.5 申請日 -
公開（公告）號 CN103820494B 公開（公告）日 2016-03-02
申請公布號 CN103820494B 申請公布日 2016-03-02
分類號 C12N15/85(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 張涌;余源;李仲夏;佟琪;王易之;王勇勝;劉軍;權(quán)富生;郭澤坤 申請（專利權(quán)）人 楊凌科元克隆股份有限公司
代理機構(gòu) 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 代理人 蔡和平
地址 712100 陜西省西安市楊凌區(qū)邰誠路3號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種可去除隨機整合的位點特異性整合載體及其構(gòu)建方法和應(yīng)用，包括pUC?ori、attB序列和多克隆位點MCS，在attB序列上下游分別設(shè)有第一loxP序列和第一rox序列，CMV啟動子連接在第一loxP序列的上游，負篩選基因與第一rox序列相連接，負篩選基因下游還連接有內(nèi)核糖體結(jié)合位點IRES2，IRES2下游為熒光標記基因，熒光標記基因下游為MCS，MCS上下游分別設(shè)有第二rox序列和第二loxP序列，并且分別與第一rox序列和第一loxP序列方向相同，MCS下游為正篩選元件。本發(fā)明為在細胞篩選中提供剔除隨機整合重組細胞而直接篩選出假attP位點特異整合的重組細胞的新的應(yīng)用。