一種基于TALEN 介導(dǎo)的Sp110 巨噬細(xì)胞特異打靶載體及重組細(xì)胞

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201410528091.6 申請日 -
公開（公告）號 CN104293833A 公開（公告）日 2015-01-21
申請公布號 CN104293833A 申請公布日 2015-01-21
分類號 C12N15/85(2006.01)I;C12N5/10(2006.01)I;C12N15/873(2010.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 張涌;吳海波;王勇勝;張艷;呂佳星 申請（專利權(quán)）人 楊凌科元克隆股份有限公司
代理機(jī)構(gòu) 陜西增瑞律師事務(wù)所 代理人 孫衛(wèi)增
地址 712100 陜西省西安市楊凌示范區(qū)邰城路3號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種基于TALEN介導(dǎo)的Sp110巨噬細(xì)胞特異打靶載體及重組細(xì)胞，對牛胎兒成纖維細(xì)胞進(jìn)行基因打靶獲得的M-S位點(diǎn)定點(diǎn)敲入Sp110基因的牛胎兒成纖維細(xì)胞。利用打靶載體中的MSR1啟動子，使得定點(diǎn)敲入的Sp110在且僅在牛的外周血巨噬細(xì)胞中正常轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。本發(fā)明利用電穿孔的方法將打靶載體和TALEN位點(diǎn)特異性核酸切割酶表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染牛胎兒成纖維細(xì)胞，通過PCR和Southern?Blotting篩選和驗(yàn)證獲得了打靶的陽性克隆細(xì)胞。以該陽性克隆細(xì)胞為核供體移入牛去核卵母細(xì)胞，獲得轉(zhuǎn)基因克隆胚胎。將轉(zhuǎn)基因克隆胚胎移植到發(fā)情的受體牛子宮中，最終生產(chǎn)成活的轉(zhuǎn)基因克隆牛。