一種通用型牛β-酪蛋白位點(diǎn)基因打靶載體及其制備方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201310100213.7 申請日 -
公開（公告）號 CN103160534B 公開（公告）日 2015-02-25
申請公布號 CN103160534B 申請公布日 2015-02-25
分類號 C12N15/63(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I;C12N15/65(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 張涌;劉旭;郭文江;華松 申請（專利權(quán)）人 楊凌科元克隆股份有限公司
代理機(jī)構(gòu) 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 代理人 汪人和
地址 712100 陜西省西安市楊凌區(qū)邰誠路3號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種通用型牛β-酪蛋白位點(diǎn)基因打靶載體及其構(gòu)建方法。所構(gòu)建的載體包括5’同源臂和3’同源臂，以牛β-酪蛋白位點(diǎn)第二內(nèi)含子鋅指核酸酶識別位點(diǎn)的上下游各延伸700～850bp的同源序列作為5’同源臂和3’同源臂。本發(fā)明通過鋅指核酸酶在DNA的特定位點(diǎn)產(chǎn)生缺口，通過同源重組末端接合來實(shí)現(xiàn)基因敲除，從而大大提高了基因敲除的效率；然后利用同源重組的方法將目的基因整合到體細(xì)胞的靶位點(diǎn)上，在打靶載體篩選基因和標(biāo)記基因的兩端加上Loxp序列便于后續(xù)工作中去除篩選基因和標(biāo)記基因，從而提高體細(xì)胞克隆的效率。