基于高通量測序技術(shù)的全血免疫組庫探測方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201410442470.3 申請日 -
公開（公告）號 CN104263818B 公開（公告）日 2016-06-01
申請公布號 CN104263818B 申請公布日 2016-06-01
分類號 C12Q1/68 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 王凱;高帆 申請（專利權(quán)）人 武漢希望云生物信息科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 武漢河山金堂專利事務(wù)所（普通合伙） 代理人 胡清堂
地址 430014 湖北省武漢市東湖新技術(shù)開發(fā)區(qū)花城大道8號武漢軟件新城2期C11棟19層01號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提供了基于高通量測序技術(shù)的全血免疫組庫探測方法，該方法包括以下步驟：(1)全血樣本中直接提取RNA(2)從RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生單鏈cDNA，將寡核苷酸接頭序列連接到單鏈cDNA的3ˊ末端，采用通用引物和序列為GAC？CTC？GGG？TGG？GAA？CAC的特殊靶向引物P-VDJ為PCR反應(yīng)的特殊引物對、連接寡核苷酸接頭序列后的單鏈cDNA為PCR模板進(jìn)行PCR反應(yīng)，對免疫受體基因組進(jìn)行擴(kuò)增(3)高通量測序。該方法所用RNA直接從全血液樣本中提取更適用于臨床，使用單一的靶特異性引物，去均一地擴(kuò)增亞型T細(xì)胞受體基因的可變區(qū)域，通過Illumina公司的Hi-SEQ？2500加條形碼方式測序，確保了相對較低的成本,少于48小時的測序時間和良好的測序深度。