基因全片段快速測(cè)序方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201410429092.5 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN104232761A 公開(kāi)（公告）日 2014-12-24
申請(qǐng)公布號(hào) CN104232761A 申請(qǐng)公布日 2014-12-24
分類號(hào) C12Q1/68(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 王凱;汪鋒;趙倩;賈海英 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 武漢希望云生物信息科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 武漢河山金堂專利事務(wù)所 代理人 胡清堂
地址 430000 湖北省武漢市高新大道666號(hào)光谷生物城B5三樓C042
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提供了基因全片段(>50kb)快速測(cè)序方法，該方法包括以下步驟：(1)采用PrimeSTAR?GXL?DNA酶，在相同PCR條件下擴(kuò)增不同基因片段，所述PCR條件優(yōu)選96℃～100℃變性5～15sec，66℃～70℃退火延伸6～10min，25～35個(gè)循環(huán)；(2)標(biāo)準(zhǔn)化PCR產(chǎn)物；(3)制備測(cè)序文庫(kù)；(4)基因測(cè)序。使用本方法可在相同PCR條件下擴(kuò)增不同長(zhǎng)度基因片段和不同Tm值的引物，相同退火溫度及延伸時(shí)間即可成功擴(kuò)增出目的片段，結(jié)合MiSeq平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序，為長(zhǎng)鏈PCR與新一代基因測(cè)序技術(shù)的結(jié)合應(yīng)用提供了一種24小時(shí)內(nèi)生成結(jié)果的快速有效的方法。