低起始量的DNA文庫構建方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201910181240.9 申請日 -
公開（公告）號 CN109868270B 公開（公告）日 2021-02-26
申請公布號 CN109868270B 申請公布日 2021-02-26
分類號 C12Q1/6806(2018.01)I;C40B50/06(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 陳建國;陳川;楊傳春;張瑜巨;莊麗雯 申請（專利權）人 深圳樂土生物科技有限公司
代理機構 深圳鼎合誠知識產(chǎn)權代理有限公司 代理人 孫銀行;彭家恩
地址 518000廣東省深圳市大鵬新區(qū)葵涌街道生命科學產(chǎn)業(yè)園A11棟201
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 一種低起始量的DNA文庫構建方法，該方法包括：取基因組DNA加入標記有生物素的隨機引物進行退火并進行擴增反應；分離純化全基因組擴增產(chǎn)物；對分離純化的產(chǎn)物進行末端補平得到線性平末端DNA；在補平的線性平末端DNA中加入連接酶進行連接反應；純化獲得雙鏈環(huán)狀DNA，然后將雙鏈環(huán)狀DNA打斷成線性DNA片段；使用鏈霉素磁珠捕獲標記有生物素的線性DNA片段；對捕獲的線性DNA片段進行末端修復以及加A尾堿基反應；在加A尾堿基反應后的線性DNA片段兩端連接接頭；對連接接頭的產(chǎn)物進行PCR擴增得到DNA文庫。本方法利用生物素標記的隨機引物對少量基因組DNA進行隨機擴增，同時實現(xiàn)基因組DNA的放大、截短和生物素標記，從而實現(xiàn)低起始量投入的大片段DNA文庫構建。??