低起始量的DNA文庫構(gòu)建方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201910181240.9 申請日 -
公開（公告）號 CN109868270A 公開（公告）日 2019-06-11
申請公布號 CN109868270A 申請公布日 2019-06-11
分類號 C12N15/10（2006.01）I; C12Q1/6806（2018.01）I; C40B50/06（2006.01）I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 陳建國; 陳川; 楊傳春; 張瑜巨; 莊麗雯 申請（專利權(quán)）人 深圳樂土生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 深圳鼎合誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 孫銀行;彭家恩
地址 518000 廣東省深圳市大鵬新區(qū)葵涌街道生命科學(xué)產(chǎn)業(yè)園A11棟201
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 一種低起始量的DNA文庫構(gòu)建方法，該方法包括：取基因組DNA加入標(biāo)記有生物素的隨機(jī)引物進(jìn)行退火并進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)；分離純化全基因組擴(kuò)增產(chǎn)物；對分離純化的產(chǎn)物進(jìn)行末端補(bǔ)平得到線性平末端DNA；在補(bǔ)平的線性平末端DNA中加入連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)；純化獲得雙鏈環(huán)狀DNA，然后將雙鏈環(huán)狀DNA打斷成線性DNA片段；使用鏈霉素磁珠捕獲標(biāo)記有生物素的線性DNA片段；對捕獲的線性DNA片段進(jìn)行末端修復(fù)以及加A尾堿基反應(yīng)；在加A尾堿基反應(yīng)后的線性DNA片段兩端連接接頭；對連接接頭的產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到DNA文庫。本方法利用生物素標(biāo)記的隨機(jī)引物對少量基因組DNA進(jìn)行隨機(jī)擴(kuò)增，同時(shí)實(shí)現(xiàn)基因組DNA的放大、截短和生物素標(biāo)記，從而實(shí)現(xiàn)低起始量投入的大片段DNA文庫構(gòu)建。