高效獲取脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201610605996.8 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN106222134A 公開（公告）日 2016-12-14
申請(qǐng)公布號(hào) CN106222134A 申請(qǐng)公布日 2016-12-14
分類號(hào) C12N5/0775(2010.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 王晶;李亞平;谷廣其;邱麗媛;趙進(jìn)軍;何文麗 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 中衛(wèi)華醫(yī)（北京）生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) - 代理人 -
地址 101111 北京市大興區(qū)經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)科創(chuàng)六街88號(hào)亦莊生物醫(yī)藥園E1-501
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及一種高效獲取脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)方法，為解決現(xiàn)有技術(shù)獲得細(xì)胞活率低問題，包括以下步驟脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的分離：脂肪組織用D.Hanks沖洗，并檢測(cè)確保無污染，加入數(shù)倍體積的I型膠原酶和trypLETM消化酶溶液混合物，進(jìn)行37℃、旋轉(zhuǎn)振蕩消化數(shù)十分鐘后停止酶解；離心棄去上清液；并用篩網(wǎng)過濾，得脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞懸液；脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)：將上述步驟獲得的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞懸液接種到培養(yǎng)瓶無血培養(yǎng)基中，進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)期間多次倒置相差顯微鏡觀察，并更換新鮮培養(yǎng)基；細(xì)胞培養(yǎng)到80?90％融合時(shí)，用trypLETM消化后擴(kuò)展接種到新培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，經(jīng)過數(shù)次傳代，得到純化的間充質(zhì)干細(xì)胞。具有消化更充分，細(xì)胞得率更高，保護(hù)間充質(zhì)干細(xì)胞不受損傷，高活率的優(yōu)點(diǎn)。