基于piggyBAC-Cas9系統(tǒng)構(gòu)建基因敲除細(xì)胞株的方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201811620283.4 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN109652458A 公開(kāi)（公告）日 2019-04-19
申請(qǐng)公布號(hào) CN109652458A 申請(qǐng)公布日 2019-04-19
分類(lèi)號(hào) C12N15/90（2006.01）I; C12N15/85（2006.01）I; C12N5/10（2006.01）I 分類(lèi) 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 鄭敦武; 段偉婷; 程冬洋 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 太倉(cāng)超云生物信息咨詢服務(wù)有限公司
代理機(jī)構(gòu) 蘇州創(chuàng)元專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 代理人 范晴
地址 215400 江蘇省蘇州市太倉(cāng)市城廂鎮(zhèn)人民南路162號(hào)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開(kāi)了基于piggyBAC?Cas9系統(tǒng)構(gòu)建基因敲除細(xì)胞株的方法，包括如下步驟：將Cas9/gRNA表達(dá)元件片段及抗性篩選片段構(gòu)建在一個(gè)載體表達(dá)；將上述載體和piggyBAC表達(dá)質(zhì)粒共電轉(zhuǎn)染到目標(biāo)細(xì)胞中，用含有對(duì)應(yīng)抗性成分的培養(yǎng)基篩選被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，挑單克隆進(jìn)行培養(yǎng)；選前述的單克隆培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行PCR擴(kuò)增，確認(rèn)實(shí)際基因組序列；最后切除Cas9/gRNA表達(dá)元件。本發(fā)明的構(gòu)件方法應(yīng)用piggyBAC轉(zhuǎn)作系統(tǒng)，在整合后還可以進(jìn)行移除，實(shí)現(xiàn)無(wú)痕基因敲除。