一種蛋白酶K高表達(dá)工程菌株的構(gòu)建及應(yīng)用

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN202110838854.7 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN113481225A 公開(kāi)（公告）日 2021-10-08
申請(qǐng)公布號(hào) CN113481225A 申請(qǐng)公布日 2021-10-08
分類號(hào) C12N15/57（2006.01）I;C12N15/81（2006.01）I;C12N1/19（2006.01）I;C12R1/84（2006.01）N 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 羅漫杰;徐燦;王梁;施婧妮;宮安;柯旭峰 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 武漢瀚海新酶生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 哈爾濱市陽(yáng)光惠遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 仇鈺瑩
地址 430223湖北省武漢市東湖新技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)高新大道666號(hào)武漢國(guó)家生物產(chǎn)業(yè)（九峰創(chuàng)新）基地B5棟
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開(kāi)了一種蛋白酶K高表達(dá)工程菌株的構(gòu)建及應(yīng)用，屬于基因工程及酶工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了一種新的編碼蛋白酶K的基因，將該基因連接在pPICZαA表達(dá)載體上，構(gòu)建蛋白酶K的單拷貝重組載體pPICZαA?PRK，并基于同尾酶法，構(gòu)建體外串聯(lián)重復(fù)表達(dá)盒式結(jié)構(gòu)多拷貝表達(dá)載體pPICZαA?PRK?nC；再通過(guò)酪蛋白透明圈法，篩選透明圈較大即潛在高表達(dá)量菌株，再通過(guò)搖瓶甲醇誘導(dǎo)表達(dá)篩選出表達(dá)量最高的菌株。相對(duì)于通過(guò)抗生素壓力的篩選方法相比，本發(fā)明的構(gòu)建方法和篩選方法不僅環(huán)保，而且能極大縮短篩選時(shí)間并節(jié)省人力成本。