用于表達(dá)限制性內(nèi)切酶ApaLI的甲基化保護菌株的篩選方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201910970054.3 申請日 -
公開（公告）號 CN110577923A 公開（公告）日 2019-12-17
申請公布號 CN110577923A 申請公布日 2019-12-17
分類號 C12N1/21（2006.01）; C12N15/70（2006.01）; C12Q1/689（2018.01）; C12Q1/10（2006.01）; C12R1/19（2006.01） 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 張坤曉; 許恒皓; 葛紹勇; 郭馨; 龔雪梅 申請（專利權(quán)）人 莫納（連云港）生物科技有限公司
代理機構(gòu) 連云港潤知專利代理事務(wù)所 代理人 莫納（連云港）生物科技有限公司; 江蘇海洋大學(xué)
地址 222000 江蘇省連云港市高新區(qū)花果山大道17號科技創(chuàng)業(yè)城1號樓13-14層
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 一種用于表達(dá)限制性內(nèi)切酶ApaLI的甲基化保護菌株的篩選方法，該方法通過從菌株Chlorella viruss的基因組中使用甲基轉(zhuǎn)移酶M.CviRI基因的特異性引物獲得了甲基轉(zhuǎn)移酶M.CviRI的基因，再實現(xiàn)限制性內(nèi)切酶ApaLI的重組表達(dá)菌株的構(gòu)建，最后重組表達(dá)質(zhì)粒pBAD?R.ApaLI轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞[pACYC184?M.CviRI，ER2566]進(jìn)行篩選培養(yǎng)，獲得限制酶ApaLI的重組表達(dá)菌株。本發(fā)明實現(xiàn)了限制性內(nèi)切酶ApaLI的高效重組表達(dá)；利用阿拉伯糖操縱子表達(dá)系統(tǒng)嚴(yán)苛控制限制性內(nèi)切酶ApaLI的本底表達(dá)水平；篩選出的M.CviRI甲基化保護菌株同樣可應(yīng)用于其他具有類似識別位點的限制酶的重組表達(dá)。