用于表達限制性內(nèi)切酶KasI的甲基化保護菌株的篩選方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201910969528.2 申請日 -
公開（公告）號 CN110643558A 公開（公告）日 2020-01-03
申請公布號 CN110643558A 申請公布日 2020-01-03
分類號 C12N1/21;C12N15/70;C12Q1/689;C12Q1/10;C12R1/19 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 張坤曉;許恒皓;葛紹勇;李倫;韓挺翰 申請（專利權(quán)）人 莫納（連云港）生物科技有限公司
代理機構(gòu) 連云港潤知專利代理事務(wù)所 代理人 莫納（連云港）生物科技有限公司;江蘇海洋大學
地址 222000 江蘇省連云港市高新區(qū)花果山大道17號科技創(chuàng)業(yè)城1號樓13-14層
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明是一種用于表達限制性內(nèi)切酶KasI的甲基化保護菌株的篩選方法，該方法從菌株Haemophilus haemolyticus的基因組中使用甲基轉(zhuǎn)移酶M.HhaI基因的特異性引物獲得了甲基轉(zhuǎn)移酶M.HhaI的基因；再經(jīng)構(gòu)建甲基轉(zhuǎn)移酶M.HhaI的重組表達菌株，篩選、構(gòu)建限制性內(nèi)切酶KasI的重組表達菌株，最后重組表達質(zhì)粒pBAD?R.KasI轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞進行篩選培養(yǎng)，獲得限制酶KasI的重組表達菌株。本發(fā)明方法實現(xiàn)了限制酶KasI的高效重組表達；利用阿拉伯糖操縱子表達系統(tǒng)進行限制酶KasI的重組表達；抵抗限制酶KasI對宿主基因組DNA的酶切，篩選出的M.HhaI甲基化保護菌株同樣可應(yīng)用于其他具有類似識別位點的限制酶的重組表達。