一種高效重組表達(dá)限制性內(nèi)切酶的方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201710035737.0 申請日 -
公開（公告）號 CN107058260A 公開（公告）日 2017-08-18
申請公布號 CN107058260A 申請公布日 2017-08-18
分類號 C12N9/22(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 高嵩;張坤曉;許恒皓;李肖;胡艷紅;張穎;吳勝月 申請（專利權(quán)）人 莫納（連云港）生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 連云港潤知專利代理事務(wù)所 代理人 淮海工學(xué)院;莫納（連云港）生物科技有限公司
地址 222000 江蘇省連云港市海州區(qū)通灌南路108號淮海工學(xué)院海洋藥物研究院高嵩轉(zhuǎn)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 一種高效重組表達(dá)限制性內(nèi)切酶的方法，包括如下步驟：（1）先將限制性內(nèi)切酶基因插入，再將載體轉(zhuǎn)化導(dǎo)入大腸桿菌，篩選培養(yǎng)、測序，獲得限制性內(nèi)切酶的重組表達(dá)質(zhì)粒，質(zhì)粒載體為利用乳糖操縱子和T7啟動子調(diào)控，IPTG誘導(dǎo)的pET系列表達(dá)載體；（2）將限制性內(nèi)切酶的重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至BL21（DE3）pLysS感受態(tài)細(xì)胞中，篩選獲得限制性內(nèi)切酶的重組表達(dá)菌株；（3）擴(kuò)大培養(yǎng)限制性內(nèi)切酶的重組表達(dá)菌株并誘導(dǎo)表達(dá)限制性內(nèi)切酶。本發(fā)明方法利用葡萄糖對乳糖操縱子表達(dá)系統(tǒng)本底表達(dá)的抑制作用，以及BL21（DE3）pLysS菌株自身對乳糖操縱子表達(dá)系統(tǒng)本底表達(dá)的嚴(yán)苛控制作用，省略了對宿主DNA的甲基化保護(hù)步驟，不僅大大簡化了重組表達(dá)過程，可以應(yīng)用于多種限制酶的重組表達(dá)。