一種體外擴(kuò)增外周血NK的方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN202111617589.6 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN114438028A 公開(kāi)（公告）日 2022-05-06
申請(qǐng)公布號(hào) CN114438028A 申請(qǐng)公布日 2022-05-06
分類(lèi)號(hào) C12N5/0783（2010.01）I 分類(lèi) 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 寇大蓮;黃雨;鐘文英;王晗;幸倚帆;程威 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人 成都康景生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 北京中索知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 唐亭
地址 610000四川省成都市溫江區(qū)芙蓉大道二段733號(hào)三醫(yī)創(chuàng)新中心（三期）9棟第1、2層
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開(kāi)了一種體外擴(kuò)增外周血NK的方法，其采用的NK完全培養(yǎng)基中包括以下組分：250～1000IU/ml的IL?2、10～500ng/ml的IL?15、10～500ng/ml的IL?21、2～20ug/ml的肽聚糖、5％～10％的滅活自體血漿；所述NK完全培養(yǎng)基以貝索基礎(chǔ)培養(yǎng)基為基液，在基液中加入IL?2、IL?15、IL?21、肽聚糖、滅活自體血漿，形成NK完全培養(yǎng)基。將新鮮血液離心分離，吸取上層淡黃色血漿于離心管，56℃水浴30min滅活，然后離心去除沉淀，將上層血漿轉(zhuǎn)移至新的離心管置于4℃冰箱保存?zhèn)溆?；下層血?xì)胞層用于提取PBMC；將獲取的PBMC以NK完全培養(yǎng)基進(jìn)行重懸，并將濃度調(diào)整至1～2×106cells/ml，接種于75cm2培養(yǎng)瓶中混合，置于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。本發(fā)明所培養(yǎng)NK數(shù)量可擴(kuò)增170倍左右，而NK純度更是高達(dá)97％以上，遠(yuǎn)超行業(yè)水平。