一種基于gp120/CCR5阻斷功能及其生物效應(yīng)的藥物快速篩選方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201811653600.2 申請日 -
公開（公告）號 CN109652454A 公開（公告）日 2021-06-22
申請公布號 CN109652454A 申請公布日 2021-06-22
分類號 C12N15/867;C12N5/10;C12Q1/02;C12R1/91 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 范春雷 申請（專利權(quán)）人 杭州邁爾德生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 北京工信聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 商琛
地址 310052 浙江省杭州市濱江區(qū)長河街道濱安路688號2幢C樓2層218室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明建立了一種基于gp120/CCR5阻斷功能及其生物效應(yīng)的藥物快速篩選方法：將紅色熒光蛋白tagRFP偶聯(lián)于gp120蛋白羧基末端（C端），構(gòu)建真核表達(dá)載體，并制備gp120?tagRFP融合蛋白；將人源CD4蛋白基因構(gòu)建在CMV啟動(dòng)子下；將人源CCR5基因構(gòu)建在CMV啟動(dòng)子下游，將綠色熒光蛋白基因d2EGFP構(gòu)建在NF?κB RE?TATA?like人工復(fù)合調(diào)控元件的下游，兩者構(gòu)建于同一個(gè)慢病毒載體內(nèi)；并建立新型的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系CD4.CCR5.CCR5.NF?κBR?d2EGFP/Jurkat；以gp120?tagRFP與細(xì)胞系的親和進(jìn)行熒光檢測篩選阻斷劑。本方法可精確反映抗CCR5藥的效應(yīng)，并可同時(shí)獲得阻斷功能與CC趨化因子/CCR5信號通路的生物學(xué)效應(yīng)數(shù)據(jù)，構(gòu)建了快速篩選抗CCR5藥物和評估其生物學(xué)效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?/td>