一種新型冠狀病毒SARS-CoV-2木瓜樣蛋白酶表達和純化方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202011351314.8 申請日 -
公開（公告）號 CN112481242A 公開（公告）日 2021-03-12
申請公布號 CN112481242A 申請公布日 2021-03-12
分類號 C12R1/19(2006.01)N;C12N9/50(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 張進;李健;鐘芳林;萬雙燕 申請（專利權）人 深圳晶蛋生物醫(yī)藥科技有限公司
代理機構 新余市渝星知識產(chǎn)權代理事務所（普通合伙） 代理人 廖平
地址 518000廣東省深圳市坪山區(qū)坪山街道六聯(lián)社區(qū)坪山大道2007號創(chuàng)新廣場C1102
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種新型冠狀病毒SARS?CoV?2木瓜樣蛋白酶表達和純化方法，步驟有：構建并轉化表達質粒；取菌液到含有50μg/ml Kan+抗生素的LB液體培養(yǎng)基中，在搖床上培養(yǎng)，加入IPTG，誘導培養(yǎng)；菌液離心，在緩沖液中重懸，破碎離心取上清鎳柱進行蛋白酶純化，不同咪唑濃度的洗脫液進行洗脫，將含有PLpro的洗脫液用陰離子交換柱進行進一步的純化，得到目的蛋白酶，本發(fā)明的優(yōu)點有：利用大腸桿菌蛋白表達系統(tǒng)獲得大量PLpro，并且周期短，耗費成本低，轉化操作簡單，可重復性高，可投入大量生產(chǎn)過程，能獲得高純度目標產(chǎn)物，為抗病毒研究提供基礎。??