一種可用于胚胎注射制備敲除小鼠的Cas9蛋白的制備方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201510269389.4 申請日 -
公開（公告）號(hào) CN104962595B 公開（公告）日 2018-11-27
申請公布號(hào) CN104962595B 申請公布日 2018-11-27
分類號(hào) C12P21/02;C07K1/34;C07K1/22 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 黃軍就;陳昱僖;松陽洲 申請（專利權(quán)）人 廣州美格生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 代理人 廣州美格生物科技有限公司
地址 510000 廣東省廣州市國際生物島螺旋四路1號(hào)辦公區(qū)第二層210單元
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種可用于胚胎注射制備敲除小鼠的Cas9蛋白的制備方法，將Cas9蛋白序列轉(zhuǎn)化入pET28a?ccdB?CmR載體，再轉(zhuǎn)化至原核表達(dá)菌株，經(jīng)過誘導(dǎo)表達(dá)后，收集菌體，經(jīng)親和純化、用超濾管濃縮純化、透析后即得到純化的Cas9蛋白；所述pET?28?ccdB?CmR載體是以原核表達(dá)載體pET28a基礎(chǔ)，在Hind III和Xho I酶切位點(diǎn)之間插入NotI?ccdB?CmR?AscI序列得到。本發(fā)明構(gòu)建了高效的Cas9蛋白原核表達(dá)系統(tǒng)，表達(dá)得到的Cas9蛋白經(jīng)體外切割實(shí)驗(yàn)證明具有體外活性，可特異切割體外DNA；胚胎注射實(shí)驗(yàn)證明純化的Cas9蛋白具有體內(nèi)活性，可用于制備基因修飾動(dòng)物。