一種停滯棒桿菌的高效轉(zhuǎn)化方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202011389348.6 申請日 -
公開（公告）號 CN112430561A 公開（公告）日 2021-03-02
申請公布號 CN112430561A 申請公布日 2021-03-02
分類號 C12R1/15(2006.01)N;C12N1/21(2006.01)I;C12N15/77(2006.01)I 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 蔡友華;鄭穗平;謝瑩玉;趙楠楠;謝學敏;余宇堅 申請（專利權）人 廣東肇慶星湖生物科技股份有限公司
代理機構 廣州粵高專利商標代理有限公司 代理人 楊利娟
地址 526040廣東省肇慶市端州區(qū)工農(nóng)北路67號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明屬于分子生物學技術領域，具體為一種適用于停滯棒桿菌的高效轉(zhuǎn)化方法。其轉(zhuǎn)化方法重點對停滯棒桿菌電轉(zhuǎn)化條件進行系統(tǒng)優(yōu)化，通過對培養(yǎng)基、電場強度等因素的系統(tǒng)優(yōu)化，提高轉(zhuǎn)化效率，從而實現(xiàn)對停滯棒桿菌基因組的編輯，達到構建目標工程菌的目的?？刂破鹗脊饷芏戎礝D 600nm參數(shù)為0.29～0.31，將上述種子液轉(zhuǎn)接入優(yōu)化后的感受態(tài)培養(yǎng)基中，在31～32℃，249～252rpm培養(yǎng)，使OD 600nm參數(shù)達到0.7～1.1；當OD600nm值為0.7～1.1的感受態(tài)細胞，1μg的質(zhì)粒用量，6min的冰浴時間，10％甘油、1.8KV、5ms、連續(xù)電擊3次，恢復時間為3h組合的轉(zhuǎn)化效率最高，達到了331cfu/μg。本發(fā)明的停滯棒桿菌的高效轉(zhuǎn)化方法操作簡單，轉(zhuǎn)化率高。??