一種基于高通量測序構(gòu)建鼠TCRA文庫的多重PCR引物及方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201610821985.3 申請日 -
公開（公告）號 CN106282179A 公開（公告）日 2017-01-04
申請公布號 CN106282179A 申請公布日 2017-01-04
分類號 C12N15/11(2006.01)I;C40B50/06(2006.01)I 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 范盤生;李仁強;于海禮 申請（專利權(quán)）人 北京天科雅生物科技有限公司
代理機構(gòu) 北京中濟緯天專利代理有限公司 代理人 北京天科雅生物科技有限公司;重慶天科雅生物科技有限公司
地址 102206 北京市昌平區(qū)回龍壩鎮(zhèn)中關(guān)村生命科學園生命園路8號院一區(qū)1號樓3層332室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公布了一套基于高通量測序技術(shù)的多重PCR引物及其方法，用該方法來擴增鼠T淋巴細胞群TCRA基因mRNA，對擴增子文庫進行測序以產(chǎn)生T細胞受體庫的免疫應(yīng)答譜，了解免疫狀態(tài)并揭示發(fā)病機制。具體為以mRNA為模版高覆蓋的擴增T淋巴細胞TCRA基因CDR3區(qū)域，同時獲得VDJC片段的組合信息。構(gòu)建TCRA基因擴增子文庫的引物包括：正向引物一組共39個，通過一一對應(yīng)方式覆蓋23個V片段；反向引物一組共32個，由測序接頭、key序列、barcode編碼及TRAC特異性反向互補序列串聯(lián)組成，其中barcode序列分為32種，可在一次測序?qū)嶒炛袦y序32個樣本。通過該種方法，可以有效的擴增98個有功能的TRAV片段，同時對TRAJ片段實現(xiàn)無偏差擴增，為免疫組學的基礎(chǔ)及臨床研究提供幫助。